В 1516 году совершил плавание в Америку в город Санта-Доминго. В 1522 году под командованием Эрнана Кортеса совершил поход в Мексику, впоследствии находился в отряде конкистадора Педро де Альварадо, участвуя в завоевании территорий современных Мексики, Гватемалы и Сальвадора.
В 1536 году Рохас отправился в Перу в составе сил, посланных в помощь для Франсиско Писарро для завоевания Империи Инков. В 1538-1539 годах он участвовал в завоевание области Чаркас в Боливии. После основания города Ла-Плата Рохас стал первым его губернатором. Вместе с Лопе де Агирре исследовал территорию индейцев Чунчос.
В 1543 году по приказу губернатора Кристобаля Вака де Кастро исследовал территорию Рио-де-ла Платы
Диего де Рохас скончался в 1544 году в городе Сантьяго-дель-Эстеро от последствий вызванных ранением отравленной стрелой.
