Согласно житию, Исидор родился в окрестностях города Бранденбурга в славянской семье католического вероисповедания. Приняв подвиг юродства Исидор пешком дошёл до Ростова и принял там православие. Житие сообщает о многочисленных чудесах Исидора и о его аскетическом образе жизни. Известны были и его предсказания, за сбываемость которых его прозвали Твердисловом. Исидор скончался в 1474 году и был похоронен на месте хижины где он жил. Позднее над ней был построен храм Вознесения Христова, где его мощи находятся до настоящего времени.
Почитание Исидора началось с уже в XV веке (то есть сразу после его смерти). Иван Грозный считал его одним из великих русских чудотворцев (Исидору приписывалось освобождение в 1563 году города Полоцка от польских войск). В «Уставе церковных обрядов Московского Успенского собора» (1636 год) указывается: «Мая в 14-й день Исидору Ростовскому благовест в лебедь, трезвон средний».
Согласно иконописному подлиннику Исидор изображается следующим образом: «Подобием рус, власы велики, брада аки Никиты мученика, подоле, риза на нем едина разодрана серодикая, правое плечо наго, руки крестообразно, ноги голы».
